■ 產品介紹
Y187菌株是Clontech公司開發的GAL4系統酵母單雜，雙雜實驗用菌株，MATα型，可直接轉化質粒或與MATa型酵母菌株（Y2HGold，AH109等）通過mating操作進行篩庫試驗。，Transformation marker為: trp1, leu2，報告基因為：lacZ, MEL1。Y187 -GAL4酵母雙雜系統需要兩種質粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。質粒PGBKT7的篩選標志為TRP1，用于表達DNA-BD(來自酵母轉錄因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白；質粒PGADT7的篩選標志為LEU，用于表達AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)與目標蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4系統原理：一個完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個結構域：位于N端1 ~ 174位氨基酸區段的DNA結合域（DNA-BD）和位于C端768 ~881 位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結合。而AD可以啟動UAS下游的基因進行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄，但當二者接近時，則呈現完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動子下游基因轉錄表達。正常條件下，BD不與AD結合，將要檢測的蛋白質分別與BD和AD融合，形成 bait 融合蛋白（bait -BD）和 prey 融合蛋白（prey-AD），如果 bait 和 prey發生相互作用，就會促使 BD 和 AD 的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉錄。Y187有兩個報告基因：lacZ, MEL1，分別由兩種不同的啟動子（G1，M1）啟動，這兩種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽性發生的概率。Y187菌株可用YPDA在28℃有氧的條件下培養，使用30%的甘油保藏菌種。 |
基因型： | MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met-, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ, MEL1 |
■ 基本信息
培養基: | YPD/YPDA |
菌株類別: | 酵母雜交菌 |
培養條件: | 28℃，有氧，YPD/YPDA |
質粒轉化: | PEG/liAC；化轉/電轉 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應用: | 酵母雙雜交 |
■ 使用方法
收到菌液及時四區劃線活化，挑取單克隆在YPD中培養到生長對數中后期加入終濃度30%無菌甘油保種，分裝置于-80℃保存，避免反復化凍。建議超凈臺內劃線涂板，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 酵母菌在YPD培養基上會變粉，是正常現象，可以由此特性鑒別是否為酵母菌。
2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降，不建議直接長期保存。
3. 活化保種的種管建議分裝保存，反復凍融菌株活力下降。
4. 本產品僅可用于實驗室研究，不能用于動物，人體以及作為食品添加劑等用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
